荧光组c阵容搭配

下面将有我来为大家聊一聊荧光组c阵容搭配的问题，希望这个问题可以为您解答您的疑问，关于荧光组c阵容搭配的问题我们就开始来说说。

我想你说的“对照样品”应该是用于制作标准曲线的标准品（常用质粒构建的重组DNA），稀释4-5个梯度，可以做标准曲线。所谓双曲线，就是用这个所谓的“对照样品DNA”，一个用来做目的基因的标准曲线，一个用来做内参基因的标准曲线。

2-△△C中处理前和处理后，我没有明白。

如何选择适合的流式抗体（五）：举例

举例一：BD流式仪器FACSCalibur试剂选择及常见问题解答

一、如何搭配流式抗体荧光标记

流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多

A、?如何根据流式细胞仪搭配流式抗体

1）?BD流式细胞仪（06版目录第614页）

流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：

流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur?(FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。

不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-Texas?Red,?PE-Cy5,?PerCP,?PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed,?PE-Cy5,?PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的

搭配荧光素原则

搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意

1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了Alexa?Fluro488就不能选FITC?Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas?Red,?PE-Cy5,?PerCP,?PerCP-Cy5.5,?PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。

2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。

比如常用的搭配是F?I?T?C(?F?L?1?)＋P?E（F?L?2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),?这个搭配组合可以更改成Alex?Fluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),?或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex?Fluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度

B、?BD公司抗体有多少种荧光素

1）?供应商能提供的每种抗体的荧光素是不一样的我们需要根据同时结合供应商能提供的每种抗体的荧光素进行搭配。原则上同一个标志的不同的克隆号带同1个荧光素在应用上没有区别的，但是有些不同克隆号的抗体之间可能会有一些稍微的差异，需要仔细看说明书。我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体

2）?荧光素

可以登陆www.bdbiosciences.com/spetra，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。

为什么要推荐使用Alex?Fluro488和Alex?Fluro647呢？

因为这些荧光非常明亮，对激光非常稳定，适合流式细胞仪的光谱性质，对PH值不敏感，具有水溶性。此外，他们联合使用时发射光谱存在巨大差异，无需补偿。

C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？

如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。

二、同型对照（Isotypy?Control）

1、为什么要用同型对照？

同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：

样本管：一抗＋样本

同型对照管：同型对照＋样本

2、如何选择同型对照？

一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56?APC标记的抗体，货号是555518,成份是Mouse?IgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的Mouse?IgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是Mouse?IgG1,κ。它的同型对照是纯化的Mouse?IgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：

样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗Mouse?IgG1＋样本

同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗Mouse?IgG1＋样本

如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse?IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的Mouse?IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse?IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse?IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse?IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse?IgG2作为同型对照。

3、如何查找同型对照？

同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NON?HUMAN?PRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56?APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是Mouse?IgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中Mouse?Immunoglobulin?Isotype表格中，第191页，APC标记的Mouse?IgG1,κ，货号是555751。

4、哪些客户需要使用同型对照？

A?对流式不是非常熟悉的客户。

B?做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。

C?使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。

D?对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。

5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？

首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。

三、补偿微球

流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BD?CompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。

第四套人民币80版5角的冠号是哪些

第一大组(99种):CP、CQ、CR、CS、CT、CU、CW、CX、CY、CZ、EP、EQ、ER、ES、ET、EU、EW、EX、EY、EZ、GP、GQ、GR、GS、GT、GU、GW、GX、GY、GZ、IP、IQ、IR、IS、IT、IU、IW、IX、IY、IZ、

AP、AQ、AR、AS、AT、AU、AW、AX、AY、AZ、BP、BQ、BR、BS、BT、BU、BW、BX、BY、BZ、DP、DQ、DR、DS、DT、DU、DW、DX、DY、DZ、FP、FQ、FR、FS、FT、FU、FW、FX、FY、FZ、

HP、HQ、HR、HS、HT、HU、HW、HX、HY、HZ、JP、JQ、JR、JS、JT、JU、JW、JX- JZ;

第二大组(100种)：PA、PB、PC、PD、PE、PF、PG、PH、PI、PJ、RA、RB、RC、RD、RE、RF、RG、RH、RI、RJ、TA、TB、TC、TD、TE、TF、TG、TH、TI、TJ、WA、WB、WC、WD、WE、WF、WG、WH、WI、WJ、

YA、YB、YC、YD、YE、YF、YG、YH、YI、YJ、QA、QB、QC、QD、QE、QF、QG、QH、QI、QJ、SA、SB、SC、SD、SE、SF、SG、SH、SI、SJ、

UA、UB、UC、UD、UE、UF、UG、UH、UI、UJ、XA、XB、XC、XD、XE、XF、XG、XH、XI、XJ、ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG、ZH、ZI、ZJ;

第三、四大组(54种)：PK、PL PM、PN、PO、RK、RL、RM、RN、RO、TK、TL TM、TN、TO、WK、WL、WM、WN、WO、YK、YL YM、YN、YO、

QK、QL、QM、QN、QO、SK、SL、SM、SN、SO、UK、UL、UM、UN、UO、XK、XL、XM、XN、XO、ZK、ZL、ZM、ZN、ZO、AK、AL、AM、JO;

第五、六大组(0种)

第七大组(46种)：AA、AB、AC、AD、AE、AF、AG、AH、AI、AJ、CA、CB、CC、CD、CE、CF、CG、CH、CI、CJ、EA、EB、EC、ED- -EG、EH、EI、EJ、GA、GB、GC、GD、GE、GF、GG、GH、GI、GJ、IA、IB、IC、ID、IE、JH、JI、JJ;

第八大组(100种)：PP、PQ、PR、PS、PT、PU、PW、PX、PY、PZ、RP、RQ、RR、RS、RT、RU、RW、RX、RY、RZ、TP、TQ、TR、TS、TT、TU、TW、TX、TY、TZ、

WP、WQ、WR、WS、WT、WU、WW、WX、WY、WZ、YP、YQ、YR、YS、YT、YU、YW、YX、YY、YZ、QP、QQ、QR、QS、QT、QU、QW、QX、QY、QZ、

SP、SQ、SR、SS、ST、SU、SW、SX、SY、SZ、UP、UQ、UR、US、UT、UU、UW、UX、UY、UZ、XP、XQ、XR、XS、XT、XU、XW、XX、XY、XZ、ZP、ZQ、ZR、ZS、ZT、ZU、ZW、ZX、ZY、ZZ;

第九大组(22种)：KK、KL、KM、KN、KO、MK、ML、MM、MN、MO、OK、OL、OM、ON、OO、LK、LL、LM、LN、LO、NK- - - NO。

共计421种

：

一区:共发行99个冠号，其中4个是补号(JZ、JX、JW、JU)JY为样票，未发行;保定543厂：补号JW,D组后期，F组前期，H组后期，J组其他未知，补号最大流水号JW12;

西安厂：补号JU、F组后期，其他未知，补号最大流水号JU034;还有二个厂分别印制JZ,JX补号，较珍惜，此二补号都为早期冠号所补，有一厂为北京厂补号JX;另一厂为上海厂补号JZ。JZ的最大流水号为JZ082,JX的最大流水号为JX025,都为珍惜补号;

二区：共发行所有的100个冠号，其中2个为补号(ZJ、ZI);保定543厂：补号ZJ,1995年9月至1998年末印制，所印冠号：P组、T组、Q组前部，U组、X组前部，大约50个冠号，补号最大流水号ZJ079;

西安厂：补号ZI,1996年8月至1999年8月，所印冠号：R组、W组、Y组、Q组后部，S组、X组后部、Z组，大约50个冠号，补号最大流水号ZI121;

三区：共发行全部的50个冠号，其中2个为补号(ZO、ZN)保定543厂：补号ZO,1999年3月至11月印制，所印冠号：P组、T组后部、W组，大约12个冠号，补号最大流水号ZO003,印刷冠号稀少;

西安厂：补号ZN,1999年9月至2001年9月印刷，所印冠号：R组、T组前部、Y组、Q组、S组、U组、W组、X组、Z组，共36个冠号，补号最大流水号ZN039;

七区：共发行55个冠号，其中3个为补号(JH、JI、JJ);所印冠号有：A组、C组、E组、IA-IE、D组。保定543厂：补号JJ,2000年初至2002年印制，所印冠号：A组、C组前部、E组后期、I组。大约23个冠号，补号最大流水号JJ035;

南昌厂：补号JI,2001年3月至2002年，印刷冠号：C组、E组前部，大约9个冠号;西安厂：补号JH,2001年8月至2002年末，印刷冠号：G组、D组，大约20个冠号，补号最大流水号JH010;

八区：共发行全部的100个冠号，其中5个为补号(ZU、ZW、ZX、ZY、ZZ)成都厂：补号ZW,2005年3月至2009年7月，印刷冠号：PP-PS、RT-RU、TP、YP-YQ、SS-SZ、UP-US、ZP-ZR共24个冠号，补号最大流水号ZW033;

北京厂：补号ZX,2005年3月至2008年12月印制，印刷冠号：PT-PX、TR-TX、XT-XY、YT-YZ、QP-QR、XT-XY共28个冠号，补号最大流水号ZX006;

西安厂：补号ZY,2005年3月至2008年12月，印刷冠号：PY-PZ、RP-RS、RW-RZ、TZ、WP-WU、YR-YS、QS-QZ、SP-SQ、UT-UZ、、XP-XS共38个冠号，补号最大流水号ZY046;

保定543厂：补号ZZ,2009年2月，印刷冠号：ZS,ZT共2个;未发现ZU补号，及其出处;九区：共发行22个冠号(正在发行)，其中有补号1个(NO)，其中NL、NM、NN未发行。

保定543厂：补号NO,2009年2月至12月印制，印刷冠号：K组、M组、O组、L组、N组共21个冠号;四区：印刷3个冠号，其中有1个补号(JO)。印刷过九区后印制四区，印制四个冠号就转而印制三冠80版5角。西安厂：补号JO,2009年12月印制印刷冠号:AK-AM共3个。

百度百科-第四套人民币

流式三色荧光怎么选不用做补偿

三色抗体命名为A、B、C

同型对照（阴性对照）管：A同型+B同型+C同型

单阳性对照

A检测管：A+B同型+C同型

B检测管：B+A同型+C同型

C检测管：C+A同型+B同型

不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。

样本为PBMC，想用三色标记Treg细胞，分别为CD4-PECY，CD25-Fitc，Foxp3-PE，想知道如何设置荧光补偿，用的是BD的流式仪，1、是设置阴性管一个，单阳性管每种一个，样品管一个么？

荧光素强度依次为PE， PECY5 APC FITC, PE最强，FITC最弱。 所以，建议抗体组合为：

Foxp3-PE，CD4-FITC，CD25-PECy5.5或者CD25-APC。

同时购买三个相应的同型对照抗体。

样品管设置如下：

1. cell + FITC-isotype + Pecy5.5（ or APC）-isotype + PE-isotype

2. Cell + FITC-isotype + CD25-mAb + PE-isotype

3. Cell + PE-mAb + FITC-isotype + Pecy5.5（ or APC）-isotype

4. Cell + CD4-FITC + Foxp3-PE + CD25 -PECy5.5( or APC)。 [这一管的数据可以拿来分析用]。

在充分了解调整电压和补偿原理的基础上，也可以做一些简化。如果不太懂，就按照这个来。其中Foxp3的抗体和同型对照抗体都是在固定破膜以后再加，不是与CD4或者CD25同时加。

好了，今天我们就此结束对“荧光组c阵容搭配”的讲解。希望您已经对这个主题有了更深入的认识和理解。如果您有任何问题或需要进一步的信息，请随时告诉我，我将竭诚为您服务。